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    親和力對于癌癥免疫療法至關重要
    來源:      時間:2021-12-06

    近年來,免疫療法已成為癌癥研究最熱門的領域之一,能從根本上改變諸多患者的疾病治療方式,常見的幾種免疫療法類型包括:

    1. 免疫檢查點抑制劑,即阻斷免疫檢查點的藥物。藥物通過阻斷它們,可以讓免疫細胞對癌癥做出更強烈的反應。常見的免疫檢查點抑制劑藥物能作用于CTLA-4, PD-1等檢查點蛋白。

    2. T細胞轉移療法,也可稱為過繼免疫療法或免疫細胞療法,是能增強T細胞抗癌能力的療法。在該療法中,免疫細胞是從患者腫瘤中提取的,最終由靜脈回輸到患者體內。

    3. 單克隆抗體或治療性抗體療法,是在實驗室中創建免疫系統蛋白質,旨在按細胞上的特定目標結合。部分單克隆抗體會標記癌細胞,以便癌細胞能更好地被免疫系統發現并摧毀。

    然而,不論是單抗,還是過繼性細胞療法,對癌癥細胞的親和力對于治療成功至關重要。下面我們從三篇文章來探索一種新的表征親和力,動力學的方法。


    抗體和人類細胞結合的親和力動力學表征

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    鏈接:https://doi.org/10.3390/ijms19103089


    摘要:

    白細胞介素23/白細胞介素17(IL-23/IL-17)促炎軸在幾種慢性自身免疫性疾病的發病機制中起著關鍵作用。Th17細胞的激活途徑刺激多種炎癥基因的轉錄,導致炎癥介質的分泌。


    諾華國際AG產品,人單克隆抗體蘇金單抗(Cosentyx), 靶向IL-17A的細胞因子,可用于治療銀屑病,強直性脊柱炎和牛皮癬性關節炎。雖然基于單抗的生物制劑仍然是藥物開發的主要路線,但通過定向進化方法產生的源自小蛋白結構域支架的非免疫球蛋白結合蛋白作為下一代治療方法備受關注。


    在這項工作中,我們使用ABD衍生的高度復雜的組合文庫來生成一組獨特的針對人IL-17受體A的高親和力結合蛋白。我們選擇了已發現序列家族的7個代表,并證明其中5個可溶性IL-17RA-IgG嵌合體并與表達IL-17RA的THP-1細胞結合。與通過計算機對接預測的阻斷功能相關,這些變體抑制IL-17A細胞因子與重組IL-17RA結合,并表現在體外正常人皮膚成纖維細胞上證明的免疫抑制潛力。因此,我們致力于開發可作為獨特的IL-17RA拮抗劑靶向IL-23/IL-17促炎軸的新型非IgG免疫調節劑。


    ARS變體與人類細胞的結合,結合動力學和親和力


    通過流式細胞術在用抗人IL-17RA抗體染色THP-1細胞時得到證實(圖1)。然而,我們需要明確人THP-1細胞結合的五種ARS變體的結合參數。如圖2所示,使用了貼壁表達 IL-17RA 的人角質形成細胞 HaCaT 細胞。在通過二級鏈霉親和素-APC 偶聯物檢測到細胞表面結合的 ARS 蛋白后,使用Ligandtracer Green確定實時熒光模式下的結合親和力和速率動力學。為了獲得結合曲線,我們使用了每種 ARS 蛋白的三種濃度(3 nM、30 nM 和 90 nM),并通過在缺乏 ARS 結合劑的培養基中進行測量來評估飽和后的速率動力學。如圖2所示,觀察到 ARS014 和 ARS019 變體從細胞表面非常緩慢地釋放。這表明高親和力結合并對應于 Trace Drawer 軟件計算的值,分別為 ARS014 的Kd = 2 nM 和 ARS019 的 0.7 nM。使用這種方法,我們還分別估計了 ARS004 (1.2 nM)、ARS012 (35 nM) 和 ARS043 (32 nM) 的Kd值。

    圖1 ARS變體結合在THP-1細胞

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    圖2使用Ligandtracer Green確定ARS014和ARS019結合在HaCaT細胞的親和力,動力學。

    CAR-T 細胞療法

    目前最火熱的細胞療法莫過于CAR-T,T細胞需要適當的腫瘤特異性,足夠的數量,并且克服局部免疫抑制,才能發揮。


    新的方法定義過繼性T細胞的親和力特性

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    鏈接https://doi.org/10.1186/s12865-016-0162-z

     

    摘要:

    對自體T細胞進行基因編輯,并輸入病人體內,正在成為一種成功的癌癥療法。編輯過的細胞的親和力對于治療成功至關重要。


    病毒特異性T細胞具有高親和力(通常在nM范圍內),而針對人體自身蛋白質的T細胞由于胸腺中高親和力克隆的缺失而導致低親和力,進而避免針對自身組織和自身免疫。我們已經克隆了兩個TCR,一個TCR識別來自前列腺和乳腺癌相關抗原TARP的HLA-A2限制性肽。一個TCR識別來自巨細胞病毒(CMV)pp65抗原的HLA-A2憲制性肽。這些TCR是并排比較的。由于TARP是一種在前列腺癌細胞中高度表達的抗原,因此有可能用于臨床。因此,表征他的親和力,以及功能,為有效性和安全性提供基本的信息。


    Ligand Tracer? 測量 T 細胞與靶細胞的結合


    2 ml 培養基中的100萬個mel526 靶細胞粘附在傾斜的 10 cm 培養皿上過夜。然后將培養皿插入 Ligand Tracer?儀器(Ridgeway Instruments AB,烏普薩拉,瑞典)的傾斜旋轉平臺上,并在旋轉 (1 rpm) 間歇性實時進行熒光背景測量 30 分鐘。用羧基熒光素琥珀酰亞胺酯 (CFSE) 標記轉導和擴增的 TCR 工程 T 細胞,然后用含血清的培養基徹底清洗。然后將 CFSE 標記的 TCR 工程化 T 細胞(1.5 × 10 5細胞)添加到帶靶細胞的培養皿中。再次開始旋轉,通過檢測來自靶細胞的熒光信號(T 細胞結合)并減去來自培養皿另一側的熒光信號,實時測量 T 細胞與靶細胞的結合(結合)。90 分鐘后,再加入 3 × 10^5個 T 細胞并繼續測量。



    人乳頭瘤病毒引起的癌癥免疫治療最新進展

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    鏈接:https://doi.org/10.1111/imm.13285

     

    摘要:

    人類乳頭瘤病毒(HPV)的是生殖器癌癥的主要誘因,比如宮頸癌,還有頭,頸癌等。盡管預防性疫苗可以顯著對抗HPV,然而HPV誘導的惡性腫瘤依然是威脅健康的罪魁禍首。這里,我們對相關研究以及臨床試驗進行匯總,總結了免疫抑制劑,治療型疫苗,基因編輯手段,以及自體T細胞治療。特別是靶向性的工程化TCR T 細胞,得到了令人鼓舞的結果,并在治療HPV+-侵染的癌癥病人身上有了顯著的效果。

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    3 用于治療HPV相關癌癥的免疫治療方法

    工程化 TCR T 細胞的結構親合力表征


    在有證據表明工程化 TCR T 細胞能夠識別 MHC I 類目標表位后,必須測量它們的結構親和力。Nauerth 等人描述了一種可以定量測量動態解離(Koff率)的方法。該檢測基于可逆鏈球菌,包括工程化鏈霉親和素(稱為 Strep-Tactin ?)和對 Strep-Tactin 具有高親和力的小肽(Strep-tags ?),這些小肽與所研究的表位的熒光標記單體相關聯。

    還可以使用 LigandTracer ?儀器(Ridgeway Instruments AB)分析工程化 TCR T 細胞與靶細胞的結合。LigandTracer?實時檢測標記分子與細胞的相互作用。該儀器有一個傾斜的旋轉平臺,盤子放置在該平臺上。在培養皿的一側,目標細胞被固定并用所需的肽脈沖。將培養皿置于旋轉支架上,測量背景熒光。然后,將用羧基熒光素琥珀酰亞胺酯標記的工程化 TCR T 細胞添加到培養皿的另一側。旋轉開始,T 細胞與靶細胞的結合是通過從沒有靶細胞的平板一側減去靶細胞一側的熒光信號來測量的。

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    LigandTracer Green

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    LigandTracer Green來自瑞典,產品主要特點是:

    1. 實時監控蛋白質-細胞相互作用的動態;

    2. 直接描繪動力學曲線,得到親和力,平衡解離常數Ka,Kd,KD,以及結合模式(1:1 or 1:2, 2:1);

    3. 不同熒光標記可以通過更換檢測器實現檢測;

    4,價格合理,免維護,和低運行成本。


    覆蓋受體包括:貼壁細胞,懸浮細胞,細菌,組織,蛋白質等;


    配體涵蓋:抗體,蛋白質,多肽,納米粒子,病毒,細菌和細胞等。


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